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酵母杂交实验中，需要对筛选平板上的菌落进行鉴定，由于酵母菌具有细胞壁以及质粒拷贝数低，常规的菌P方法鉴定阳性克隆难以达到满意的成功率。Biorab出品的一步法质粒小提试剂盒通过提取液快速裂解酵母菌并纯化出质粒，无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂，单个实验操作可在20min内完成，且成功率可达95%以上。本品无需玻璃珠破碎或者溶壁酶破壁处理，相对于传统玻璃珠法提取质粒，本试剂盒的效率更高，此方法提取的酵母质粒无蛋白和盐污染，但会有部分基因组DNA污染，仅适用于PCR和大肠杆菌转化实验。酵母质粒拷贝数极低，不可通过电泳或者分光光度计定量。

• 洗涤液含有乙醇，易挥发，用后请您及时拧紧盖子。
  
• 如仅需PCR检测，可优先选用本公司酵母阳性克隆快速检测试剂盒(货号：KD2250)，无需提取步骤，可直接进行菌落PCR扩增。

• 裂解
  
  • 将提取液置于50～65℃水浴至沉淀完全溶解。
    
  • 用1.5mL或2mL的离心管离心收集酵母菌液(OD值为1.0左右)1～1.5mL，12000rpm室温离心1min，弃上清。
    
  • 向酵母菌沉淀中加入700μL提取液，吹打或震荡混匀后，于金属浴或者水浴(95℃ 5min)，得到裂解产物。
• DNA收集
  
  • 将裂解产物全部转移至吸附柱中，室温放置2min，然后12000rpm室温离心1min，弃穿透液。
    注意：不可4℃离心，否则会堵塞吸附柱。
    
  • 在吸附柱中加入700μL洗涤液，12000rpm室温离心1min，弃穿透液。
    
  • 将吸附柱放回收集管中，12000rpm室温离心30s，甩干乙醇。
    
  • 将吸附柱转移至一个干净的1.5mL离心管中。在吸附柱中央加入30～50μL洗脱液(需65～70℃预热)，室温静置2min。12000rpm室温离心2min，穿透液即为酵母质粒DNA。
    
  • 取5μL用于50μL体系的PCR反应；或取5～10μL用于大肠杆菌转化。